Simone《蜘蛛侠3》有三个大反派：毒液人、沙人和绿魔二代，沙人是本集中的头号大拍圆坏蛋，他那发亮的身体，能够变成像沙一样的物质，到处流窜；而毒液人则是在蜘蛛侠身体中注射进一种外层空间陨石物质，让蜘蛛服变黑，虽然表面上蜘蛛侠的功力增强不少，但事实不然，毒液人其实就像是坏蛋版的蜘蛛侠，他的衣服胸口也有蜘蛛图案；绿魔二代则是第一集绿魔死后，绿魔儿子哈利接下来扮演的复仇角色。
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蜘蛛侠（托比•马奎尔 Tobey Maguire 饰）在经历了重重考验之后，成者贺携为了人人敬仰的正义英雄，抱得美人归。但是，光环下蜘蛛侠，也有自己的心病：他在第一集时放首伏走了小偷导致最亲爱的叔叔被小偷杀死，帕克一直耿耿于怀。
